本发明提供了一种检测细胞内pH的比率型荧光探针及其制备方法和应用。该荧光探针的化学结构式为：。可通过4‑氰基苯硼酸与5‑溴水杨醛的反应产物在进一步与邻氨基苯硫酚反应获得。本发明的荧光探针具有高特异性，在进行相应pH检测过程中不受其他组分的干扰，可用于活细胞内pH的实时测定。该探针的灵敏度高，具有良好的荧光发射光谱特性(415‑700 nm)，通过绘制标准曲线进行细胞内pH的测定，可以实现对细胞内pH快速准确检测的目的。本发明提供的荧光探针合成方法，工艺简单易行，原料廉价易得，制备成本低，易于推广。本探针在生物监测领域具有广阔的应用前景。