本发明公开了银杂化介孔四氧化三铁抗生素免疫传感器制备方法及应用。电化学免疫传感器制备方法是在玻碳电极表面修饰硫堇-石墨烯混合溶液，通过戊二醛交联Ag-Fe3O4介孔纳米粒子孵化的抗生素抗体，并以牛血清白蛋白封闭非特异性活性位点，制备成一种抗生素电化学免疫传感器。抗生素的检测方法是将参比电极—饱和甘汞电极、对电极—铂丝电极及工作电极正确连接在电化学工作站上，通过方波伏安法进行免疫检测。本发明的抗生素电化学免疫传感器具有较高的灵敏度和专一性，检测方法简单，完成一个检测过程需要2-3分钟，具有快速高效、特异性好、成本低、操作简便等特点。