本发明公开了一种基于激发态分子内质子转移的荧光探针精确测量细胞中的单胺氧化酶B的制备方法和应用。该探针基于激发态分子内质子转移的荧光染料2‑(2' ‑羟基苯基)4(3H)喹唑啉酮与N‑Boc‑3‑氨基丙基溴连接。优势在于，不仅克服了传统检测单胺氧化酶B荧光探针生物相容性差、背景荧光强、易扩散等缺点，还具备了2‑(2' ‑羟基苯基)4(3H)喹唑啉酮的良好的光稳定性、强烈的荧光等优点。为神经系统健康和疾病提供了早期监测手段。