本发明涉及一种谷胱甘肽转移酶抗原生物传感器的制备方法及应用，属于新型纳米功能材料与生物传感技术领域。具体是基于磺酸化石墨烯(HSO3-GS)和双金属纳米多孔合金材料铂铁(PtFe)，制备的检测谷胱甘肽转移酶的夹心型电化学免疫传感器，用于检测血清中的谷胱甘肽转移酶。其特征在于：(1)磺酸化石墨烯的制备；(2)双金属多孔材料铂铁—辣根过氧化物酶—谷胱甘肽转移酶二抗复合物的制备；(3)电化学免疫传感器的制备。PtFe对H2O2具有很强的催化能力，同时利于固定更多的二抗、保持物质生物活性；将电子媒介体天青A加入底液中，避免了修饰到电极上后的泄漏问题，制备的传感器灵敏度高、特异性好、易于操作、检测限低。