本发明公开了一种同时检测四种氨基糖苷类抗生素传感器的制备方法及应用，属于新型功能材料及生物传感分析技术领域。本发明是在一个涂覆一层聚酯薄膜的矩形基片表面上，依次用银浆印刷一个参比电极，导电碳浆印刷四个工作电极、一个对电极，制得四通道丝网印刷电极。其特征在于，用铂纳米粒子—磺酸化石墨烯—羧甲基壳聚糖导电复合纳米材料将链霉素、庆大霉素、卡那霉素及壮观霉素四种氨基糖苷类抗生素的抗体分别固定到四个工作电极表面，滴涂检测液后与多通道电化学工作站检测电路相连，从而实现了四种氨基糖苷类抗生素的同时检测。本发明制备简单、加工方便、成本低、便于携带；检测方法简单、快速、灵敏度高、特异性好。