本专利公开了一种基于连接环介导等温扩增法快速检测肿瘤相关microRNA的方法，涉及电化学传感器检测技术领域。在修饰链霉亲和素标记金纳米粒子薄层的纸基电化学传感器上，利用microRNA逆转录出的cDNA可以特异性识别发卡探针H1、发卡探针H2茎的突出端，从而在连接酶的作用下形成环介导等温扩增技术的基础结构，然后在生物素标记的引物FP、二茂铁标记的引物BP的特异性识别下进行反应放大，根据生物素与链霉亲和素的特异性结合将信号固定在电极上，通过检测电流的变化实现microRNA的定量分析。本方法包括电极的预处理—探针预变性—microRNA逆转录—连接环介导扩增反应—实验方法与参数—microRNA检测线测定六个步骤，操作简便快速，省时省力，成本低，高灵敏度定量检测microRNA。