本发明公开了一种同时检测多种黄曲霉毒素印刷电极电化学免疫传感器的制备方法和应用，属于生物传感、纳米功能材料及食品安全分析技术领域。本发明是在涂覆一层聚酯薄膜的矩形基片表面上印刷7个电极，其中包括5个碳工作电极，1个银参比电极和1个对电极，7个电极引出线及引出线端部。其特征在于，用银纳米粒子—氮掺杂石墨烯—羟丙基壳聚糖导电复合纳米材料将黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2以及总黄曲霉毒素的抗体固定到各工作电极表面，滴涂检测液后与多通道电化学工作站检测电路相连，从而实现了五种黄曲霉毒素的同时检测。本发明制备简单、加工方便、成本低、便于携带。该检测方法简单、快速、灵敏度高、特异性好。