本发明公开了一种基于3D纸芯片电致化学发光DNA传感器的制备并用于同时检测Hg2+、Ag+。传感器制备方法(示意图见附图)，包括以下步骤：在计算机上设计微流控芯片图案，制备3D纸芯片传感器；按照现有方法制备多空金纳米线、PdAg合金、碳点及P酸等纳米材料，制备具有信号放大作用的PdAg@CQDs, PdAg@P-acid作为ECL探针，分别与Hg2+、Ag+进行特异性结合的DNA进行复合；利用电极表面修饰技术，将多空金纳米线修饰到传感器电极表面，吸附DNA片段，制备DNA传感器。一种同时检测Hg2+、Ag+的方法，包括如下步骤：将修饰好的电极连接到电致化学发光仪，对样品提取液中的Hg2+、Ag+进行检测。本发明的电极的特异性强，灵敏度高，可达p摩尔级；使用易处理的纸芯片传感器，实现同一电极上对两种物质进行同时检测，提高了检测效率，降低成本。