本发明公开一种二氧化硫‑甲醛荧光探针及其制备方法和应用。该探针分子式为C37H41N4O4+，具有如下所示结构：该探针在水溶液中自身荧光为红色荧光，与二氧化硫响应后，在485nm处荧光强度增强且在637nm处荧光强度显著降低(279倍)，并且可以通过肉眼观察探针荧光前后的变化。之后再与甲醛响应后，在485nm处荧光强降低且在637nm处荧光强度显著增强(256倍)，并且可以通过肉眼观察探针荧光前后的变化。本探针还可以通过共聚焦荧光显微镜检测活细胞中的二氧化硫及甲醛，并进行荧光成像。本发明探针合成简单，产率高，具有一定的潜在实用价值。
