本发明提供了一种检测碱性磷酸酶活性的方法,其包括如下步骤:A1:将三(羟甲基)氨基甲烷、焦磷酸盐混匀后,分成若干份反应体系,每一份所述反应体系中分别加入不同浓度的碱性磷酸酶,在37℃下孵育后,在每一份反应体系中依次加入醋酸缓冲液、CeO2纳米粒子和3, 3' , 5, 5' ‑四甲基联苯胺,在22~47℃下孵育后,分别进行紫外‑可见吸收光谱的测量,得到碱性磷酸酶活性与ΔA的关系方程;A2:将待测碱性磷酸酶按照步骤A1的操作进行紫外‑可见吸收光谱的测量,得到ΔA,将ΔA代入步骤A1中得到的碱性磷酸酶活性与ΔA的关系方程,计算出待测碱性磷酸酶的活性。本发明具有如下的有益效果:1、本发明所利用的CeO2纳米粒子在水溶液中分散较好;2、本发明所提出方法检测时间短。