本发明涉及一种甲醛荧光探针其制备方法、应用,属于分析化学技术领域。本发明的甲醛荧光探针,是一种具有双发射带的比率型荧光探针。其激发波长为318 nm;随甲醛浓度的升高,其在359 nm处的荧光峰值逐渐降低,同时在451 nm处产生一个新的发射带并且荧光峰值逐渐增强。本发明的甲醛荧光探针,能抗乙醛、乙二醛、甲基乙二醛、苯甲醛、丙氨酸、甘氨酸、丝氨酸、精氨酸、半胱氨酸、谷胱甘肽和葡萄糖的干扰。检测准确性高;灵敏度高;抗干扰能力强。另外,本发明的甲醛荧光探针还能检测生物样品(细胞环境)中的甲醛,现了在活细胞水平中甲醛的荧光成像,具有潜在的实际应用价值。而本发明的甲醛荧光探针的合成只需通过一步反应,方法简单,产率较高。