本发明公开了一种基于三螺旋DNA结构检测microRNA的方法,涉及荧光microRNA检测技术领域。通过三种探针之间在微流控纸芯片表面的杂交反应形成了一种新的三螺旋DNA结构,在内切酶和外切酶的作用下将三螺旋DNA结构剪切成两部分,一部分能循环参与反应中实现信号放大,另一部分和目标microRNA反应生成DNA‑RNA双链,将形成的DNA‑RNA双链转移到另一个修饰MnO2纳米片的纸芯片表面并加入DSN对microRNA检测。本方法较传统方法有更高的灵敏度、操作简单、耗时少,大大促进了一个简单,快速的检测系统的发展,有助于我们对microRNA进行定量分析以及生物体的生理病理机制的理解,并最终为疾病的诊断和治疗提供新的思路和理论基础。